植物可溶性蛋白(sprotein)ELISA試劑盒用于檢測血清、血漿、細胞培養上清液等樣本中植物可溶性蛋白(sprotein)的濃度。劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中指標表達。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中指標相結合,經過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)與待測樣品中植物可溶性蛋白(sprotein)濃度呈正相關。擬合校準品曲線,可以計算出樣本中植物可溶性蛋白(sprotein)的濃度。
操作步驟:
實驗前準備:
試劑盒從冷藏環境取出后,室溫平衡30分鐘,所有試劑使用前充分搖勻,避免局部濃度不均。
提前設置空白孔、標準品孔、待測樣本孔,做好標記,避免后續加樣混淆。
提前配置好洗滌液,按說明書比例用超純水稀釋,備用。
加樣孵育:
標準品孔加入不同濃度的標準品50μL,待測樣本孔加入預處理好的樣本10μL,再加入樣本稀釋液40μL。
每孔加入100μL酶標試劑,空白孔不加,封板膜密封后37℃恒溫孵育60分鐘。
洗滌顯色:
小心揭掉封板膜,棄去液體后甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復5次,拍干孔內殘留液體。
每孔先后加入顯色劑A、B各50μL,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
終止讀數:
每孔加入50μL終止液,此時藍色液體立即轉為黃色。
以空白孔調零,15分鐘內用酶標儀在450nm波長處依次測定各孔的吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣本中植物可溶性蛋白的實際含量。